在透射電鏡中,用電子束代替平行入射光束,用薄膜狀的樣品代替周期性結構物體,就可重復以上衍射成像過程,(2)對于透射電鏡,改變中間鏡的電流,使中間鏡的物平面從一次像平面移向物鏡的后焦面,可得到衍射譜,固定的目的主要是終止組織細胞的生化過程,同時把它們的超微結構改變控制在zui小范圍內,并保護這些結構在后續的脫水、包埋等過程中不被破壞;常用雙固定法,用一定濃度的戊二醛對樣品預固定,漂洗后使用鋨酸對樣品進行后固定。
鋨酸是強氧化劑,固定脂類、膜結構,有電子染色作用,3脫水,用適當的有機溶劑取代組織和細胞中的游離態水分,使之能與包埋劑混合,脫水要徹底,更換液體動作要迅速,脫水時間不宜過長,且固定后的樣品要充分漂洗,4滲透、包埋與聚合,4,1滲透,2包埋與聚合,加溫在60℃聚合形成固體基質,牢固地支撐整個細胞結構或組織,制成適于機械切割的固體樹脂包埋塊,利于切片,常用玻璃刀、鉆石刀進行超薄切片,刀上要裝水槽,并注入槽液。
染色方法有單染,包括鉛鹽單染和鈾鹽單染;雙染色,醋酸鈾染色和檸檬酸鉛染色,雙染色呈現結果更全面,我們一般采用的雙染法進行染色,常用染色劑:醋酸鈾,有微弱的放射性,主要染核酸、核蛋白、細胞核、結締組織,檸檬酸鉛,主要染膜結構、脂類、糖原等,易與CO2反應成沉淀,染色中應采取措施避免,電鏡照片主要解析粒徑分布、單晶/多晶、晶面結構、元素和原子分散,其本質是信號的空間分布,基本機理與比例尺地圖是一致的。