夾持劍突,將胸廓整體向頭端外翻并固定,充分暴露心臟,(此步為灌注操作的關鍵,針尖務必留在左心室,如果發現穿破室間隔、房室隔或心壁,須繼續小心進針,直到針頭進入升主動脈,然后仍夾持心臟,),灌注預熱到體溫的生理鹽水,同時剪破右心耳放血,直到右心耳流出的液體基本不帶血色,zui好刮取細胞,收集在離心管中,1500rpm離心10min(該參數可按自己的經驗調整,目的是不損傷細胞結構的情況下去掉培養液成分)。
每個容器含有N個組織時:,透射電鏡容器體積要適當增大;組織不要相互擠壓變形,2動物鈣化硬組織,基本的取材和預固定要求與普通組織相同,預固定充分后(至少過夜),轉入EDTA脫鈣固定液脫鈣,脫鈣務必充分,確保切片操作無障礙,3須灌注固定的動物組織,如圖7所示的石墨碳包覆納米鈷,通過DM軟件的偽色功能,右擊圖片,選擇ImageDisplay中的color,更改涂色模式和色階將圖片上偽色,可以充分提高圖片的顯示效果。
生物樣品TEM各實驗步驟要求,取材和預固定,透射電鏡動物普通組織,一般動物組織的取材,要點一是減少缺血缺氧時間,二是減少機械損傷,麻醉或斷頸處死均可,可根據實驗目的和條件選擇,具體如下:請盡快用戊二醛固定液預固定,如圖5所示,對圖片做選取傅里葉變換,選擇第二種校正方法,出現的變換結果中,選種對應的變換對稱點,點擊ok,出現的對話框中,填入對應晶面的1/d數值,并將單位改為1/nm,點擊ok即可。