流式細(xì)胞術(shù)(FCM)常用于測定細(xì)胞表面/胞內(nèi)/核內(nèi)抗原對(duì)細(xì)胞進(jìn)行免疫表型分析,在胞內(nèi)/核內(nèi)抗原檢測時(shí),可能會(huì)碰到“有與沒有都一樣”的尷尬情況,明明胞內(nèi)有這個(gè)抗原但硬是檢測不到。此時(shí),當(dāng)排除了實(shí)驗(yàn)誤操作、抗體非特異性、標(biāo)記淬滅等情況,不妨回頭看看是否破膜問題吧。 為 何 要 用 破 膜 劑 ? 正常情況下,熒光標(biāo)記的抗體無法通過完整的細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),用流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞內(nèi)抗原,需先利用破膜劑破壞細(xì)胞膜的完整性,產(chǎn)生可供抗體通過的小孔。破膜效果的好壞將直接影響熒光染色和結(jié)果分析。
① 細(xì)胞形態(tài)影響:利用皂素破膜,外周血細(xì)胞的流式散射光圖中淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞和粒細(xì)胞分群清晰;而另兩種破膜劑,通過與細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)和脂質(zhì)作用發(fā)揮破膜效果,易導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生皺縮,這3群細(xì)胞很難分開; ② 對(duì)抗原影響:a.標(biāo)記表面抗原和破膜兩步操作的先后順序有所影響:以檢測表面CD8為例,先標(biāo)記再破膜對(duì)CD8無明顯影響,而先破膜再標(biāo)記,乙醇和Triton-X會(huì)使表達(dá)CD8細(xì)胞比例和每個(gè)細(xì)胞上抗原表達(dá)量急劇下降;b.對(duì)不同抗原的影響不同:如檢測IFN-γ時(shí),Triton-X破膜會(huì)導(dǎo)致其檢測率降低,而皂素和乙醇無影響;檢測TNF-α?xí)r,皂素的敏感性要高于其他兩種。 ③ 其他:皂素的破膜效果是可逆的,一旦被洗掉容易導(dǎo)致破膜失效,因此在后續(xù)實(shí)驗(yàn)過程中需用含有皂素的洗滌液洗滌;有機(jī)溶劑可實(shí)現(xiàn)固定和破膜;Triton-X和Tween-20相似,可破壞所有脂質(zhì)層,可破核膜。總體來說,皂素是相對(duì)理想的細(xì)胞破膜劑,但無法破核膜
地坪固化劑是用于對(duì)混凝土地面進(jìn)行施工處理,使之不起灰、不起砂、不脫皮,增加地面的壽命,并使地面成為具有一定裝飾性和功能性的地坪。 地坪固化劑大量應(yīng)用于工廠、倉庫、 ** 等地面。目前用比較多的弗石莫地坪固化劑、金剛砂地坪固化劑、環(huán)氧地坪固化劑。金剛砂地坪固化劑市場比較亂,產(chǎn)品以次充好現(xiàn)象比較多,一般容易出現(xiàn)起灰、起砂的問題;使用環(huán)氧地坪固化劑容易起皮,壽命也相對(duì)有限;使用弗石莫地坪固化劑不起灰、不起砂、不脫皮,真正起到增加地面壽命的作用。 產(chǎn)品分類:目前用比較多的弗石莫地坪固化劑、金剛砂地坪固化劑、環(huán)氧地坪固化劑。產(chǎn)品比較:金剛砂地坪固化劑市場比較亂,產(chǎn)品以次充好現(xiàn)象比較多,一般容易出現(xiàn)起灰、起砂的問題;環(huán)氧地坪固化劑容易起皮,壽命也相對(duì)有限;使用弗石莫地坪固化劑,一般不起灰、不起砂、不脫皮,真正起到增加地面壽命的作用。產(chǎn)品應(yīng)用:地坪固化劑廣泛應(yīng)用于工廠、倉庫、 ** 等混凝土地面。