在透射電鏡中,用電子束代替平行入射光束,用薄膜狀的樣品代替周期性結(jié)構(gòu)物體,就可重復(fù)以上衍射成像過(guò)程,(2)對(duì)于透射電鏡,改變中間鏡的電流,使中間鏡的物平面從一次像平面移向物鏡的后焦面,可得到衍射譜,固定的目的主要是終止組織細(xì)胞的生化過(guò)程,同時(shí)把它們的超微結(jié)構(gòu)改變控制在zui小范圍內(nèi),并保護(hù)這些結(jié)構(gòu)在后續(xù)的脫水、包埋等過(guò)程中不被破壞;常用雙固定法,用一定濃度的戊二醛對(duì)樣品預(yù)固定,漂洗后使用鋨酸對(duì)樣品進(jìn)行后固定。
沿管壁緩慢加入戊二醛預(yù)固定液,不要沖擊細(xì)胞團(tuán),靜置30min后可送樣,請(qǐng)?jiān)?~10℃保存或運(yùn)輸,嚴(yán)禁結(jié)冰(太靠近冰箱后壁或冰袋運(yùn)輸都可能使樣品結(jié)冰,冬季寧可常溫送樣),細(xì)胞高速離心收集方法,本方法過(guò)去被大多數(shù)單位采用,沒(méi)有“GT2”時(shí)的應(yīng)急取材也可使用,各儀器公司的拍攝控制軟件是比較專(zhuān)業(yè)化的處理工具,能夠在處理基本粒徑分析、晶面間距等測(cè)量外,還能夠進(jìn)行傅里葉變換、降噪處理等,得到更加深入的數(shù)據(jù)結(jié)果。
染色方法有單染,包括鉛鹽單染和鈾鹽單染;雙染色,醋酸鈾染色和檸檬酸鉛染色,雙染色呈現(xiàn)結(jié)果更全面,我們一般采用的雙染法進(jìn)行染色,常用染色劑:醋酸鈾,有微弱的放射性,主要染核酸、核蛋白、細(xì)胞核、結(jié)締組織,檸檬酸鉛,主要染膜結(jié)構(gòu)、脂類(lèi)、糖原等,易與CO2反應(yīng)成沉淀,染色中應(yīng)采取措施避免,電鏡照片主要解析粒徑分布、單晶/多晶、晶面結(jié)構(gòu)、元素和原子分散,其本質(zhì)是信號(hào)的空間分布,基本機(jī)理與比例尺地圖是一致的。