2切片厚度50~100nm為宜:太薄反差低;太厚反差好,但結(jié)構(gòu)重疊,電子束不能穿透;,3切片應(yīng)耐電子束的強(qiáng)烈照射,不變形不升華;,4切片能夠適當(dāng)被染色,保證一定的反差;,5切片均勻,無(wú)影響拍照的皺褶、刀痕或染色污染,其中,DigitalMicrograph不僅能夠自動(dòng)識(shí)別Gatan公司電鏡拍攝的dm3、dm4、Tif文件中的標(biāo)尺、放大倍數(shù)、儀器型號(hào)等信息,還能夠?qū)D片中進(jìn)行上偽色突出對(duì)比度、選區(qū)傅里葉變換、劃線取向灰度分析等。
沿管壁緩慢加入戊二醛預(yù)固定液,不要沖擊細(xì)胞團(tuán),靜置30min后可送樣,請(qǐng)?jiān)?~10℃保存或運(yùn)輸,嚴(yán)禁結(jié)冰(太靠近冰箱后壁或冰袋運(yùn)輸都可能使樣品結(jié)冰,冬季寧可常溫送樣),細(xì)胞高速離心收集方法,本方法過(guò)去被大多數(shù)單位采用,沒(méi)有“GT2”時(shí)的應(yīng)急取材也可使用,各儀器公司的拍攝控制軟件是比較專(zhuān)業(yè)化的處理工具,能夠在處理基本粒徑分析、晶面間距等測(cè)量外,還能夠進(jìn)行傅里葉變換、降噪處理等,得到更加深入的數(shù)據(jù)結(jié)果。
染色方法有單染,包括鉛鹽單染和鈾鹽單染;雙染色,醋酸鈾染色和檸檬酸鉛染色,雙染色呈現(xiàn)結(jié)果更全面,我們一般采用的雙染法進(jìn)行染色,常用染色劑:醋酸鈾,有微弱的放射性,主要染核酸、核蛋白、細(xì)胞核、結(jié)締組織,檸檬酸鉛,主要染膜結(jié)構(gòu)、脂類(lèi)、糖原等,易與CO2反應(yīng)成沉淀,染色中應(yīng)采取措施避免,電鏡照片主要解析粒徑分布、單晶/多晶、晶面結(jié)構(gòu)、元素和原子分散,其本質(zhì)是信號(hào)的空間分布,基本機(jī)理與比例尺地圖是一致的。