該過程控制在1min內完成,(zui好有壓力控制裝置,如果沒有,zui好采用吊瓶,瓶的懸掛高度應通過動物血壓的厘米水柱數值估計,小鼠、大鼠等一般掛在高于動物身體1,5m處,停止鹽水灌注,通過三通管換用固定液繼續灌注(室溫),初始速度與鹽水一致;當動物開始強烈抽搐后,降低流速,透射電鏡從輸液器膠囊觀察窗看,維持每秒2滴,(10)常規手術取材、切割標本,浸泡固定30min后轉入4℃冰箱過夜(此步驟同普通組織取材)。
動物組織zui好在離體后1min內開始固定,透射電鏡非灌注的組織,厚度不超過4mm,請用恰當方式(比如切成寬薄片)體現位置和層次關系,請盡量不要事先切成很小的顆粒請用鋒利薄刀片切組織,朝一個方向劃,不要來回切割,不要擠壓、拉扯,含有食物殘渣、大量血液或其它黏附物的組織,請用生理鹽水漂洗,再投入預固定液,zui初的30min以后,zui好在4℃的固定液中浸泡,嚴禁結冰(太靠近冰箱后壁或冰袋運輸都可能使組織結冰,冬季寧可常溫送樣)。
生物樣品TEM各實驗步驟要求,取材和預固定,透射電鏡動物普通組織,一般動物組織的取材,要點一是減少缺血缺氧時間,二是減少機械損傷,麻醉或斷頸處死均可,可根據實驗目的和條件選擇,具體如下:請盡快用戊二醛固定液預固定,如圖5所示,對圖片做選取傅里葉變換,選擇第二種校正方法,出現的變換結果中,選種對應的變換對稱點,點擊ok,出現的對話框中,填入對應晶面的1/d數值,并將單位改為1/nm,點擊ok即可。