小型實驗動物的腦深部組織、脊髓等不易快速取出固定的標本,或需要大范圍、多器官取材時,可采用經心臟灌注固定,透射電鏡固定液zui好采用2%多聚甲醛+2,5%戊二醛,需要保全心臟相關結構的實驗,或者要觀察肺組織充氣形態的實驗禁用經心臟灌注的方法,具體步驟如下:,這些數據的二次分析成為研究工作分析和論文撰寫的重要部分,尤其是高倍透射圖片,通過后處理可獲得很多充分的數據性結果,能夠為結構和機理等的深入分析提供有力證據。
請保證固定液量充足,固定液和組織的體積比不小于20:1,組織尺寸和容器關系(只裝一個的參考標準):透射電鏡芝麻到綠豆大小(如小鼠腎上腺):請用1,5mlEP管;,黃豆大小(小鼠腎臟):請用5ml離心管;,鋪展面積類似蠶豆大小的組織片:請用平底的25ml廣口瓶;,zui好刮取細胞,收集在離心管中,1000rpm離心5~10min(初次離心參數可按自己的經驗調整,目的是不損傷細胞結構的情況下去掉培養液成分)。
生物樣品TEM各實驗步驟要求,取材和預固定,透射電鏡動物普通組織,一般動物組織的取材,要點一是減少缺血缺氧時間,二是減少機械損傷,麻醉或斷頸處死均可,可根據實驗目的和條件選擇,具體如下:請盡快用戊二醛固定液預固定,如圖5所示,對圖片做選取傅里葉變換,選擇第二種校正方法,出現的變換結果中,選種對應的變換對稱點,點擊ok,出現的對話框中,填入對應晶面的1/d數值,并將單位改為1/nm,點擊ok即可。