小鼠建議液量30ml,大鼠至少100ml,貓約500ml,透射電鏡并以此估計其他小動物用量,(8)固定液灌注過程中,觀察動物肢體是否充分僵硬,黏膜、內臟等是否充分褪去血色,如果灌注液用量過半仍沒有這些現象,立即終止灌注,行搶救性切割取材,(9)灌注完成后,撤去灌注器械,分辨率為該透射電鏡理論上能分辨zui小尺寸的能力極限,表示拍攝照片中單個像素點對應實際尺寸的大小,與放大倍數聯合表示了電鏡照片中相關細微結構的區分能力。
該過程控制在1min內完成,(zui好有壓力控制裝置,如果沒有,zui好采用吊瓶,瓶的懸掛高度應通過動物血壓的厘米水柱數值估計,小鼠、大鼠等一般掛在高于動物身體1,5m處,停止鹽水灌注,通過三通管換用固定液繼續灌注(室溫),初始速度與鹽水一致;當動物開始強烈抽搐后,降低流速,透射電鏡從輸液器膠囊觀察窗看,維持每秒2滴,(10)常規手術取材、切割標本,浸泡固定30min后轉入4℃冰箱過夜(此步驟同普通組織取材)。
生物樣品TEM各實驗步驟要求,取材和預固定,透射電鏡動物普通組織,一般動物組織的取材,要點一是減少缺血缺氧時間,二是減少機械損傷,麻醉或斷頸處死均可,可根據實驗目的和條件選擇,具體如下:請盡快用戊二醛固定液預固定,如圖5所示,對圖片做選取傅里葉變換,選擇第二種校正方法,出現的變換結果中,選種對應的變換對稱點,點擊ok,出現的對話框中,填入對應晶面的1/d數值,并將單位改為1/nm,點擊ok即可。