動物恰當麻醉,腹部朝上綁定在操作臺上,開腹,透射電鏡有利于觀察灌注效果,不必觀察時,或某些需要保持腹腔器官原位置的實驗,可直接開胸,從劍突下小心剪破膈,使肺回縮(避免剪到肺造成出血),透射電鏡隨后向兩側(cè)擴大破口,與腹壁切口靠近,剪斷兩側(cè)肋骨,繼續(xù)向頭端擴展切口,直到露出心房,用吸管小心棄上清,加入預熱到40℃的GT2專用溶液重懸細胞(輕輕搖勻或吹吸均可,不要有肉眼可見的大塊);立即以3000rpm離心10min。
動物組織zui好在離體后1min內(nèi)開始固定,透射電鏡非灌注的組織,厚度不超過4mm,請用恰當方式(比如切成寬薄片)體現(xiàn)位置和層次關(guān)系,請盡量不要事先切成很小的顆粒請用鋒利薄刀片切組織,朝一個方向劃,不要來回切割,不要擠壓、拉扯,含有食物殘渣、大量血液或其它黏附物的組織,請用生理鹽水漂洗,再投入預固定液,zui初的30min以后,zui好在4℃的固定液中浸泡,嚴禁結(jié)冰(太靠近冰箱后壁或冰袋運輸都可能使組織結(jié)冰,冬季寧可常溫送樣)。
生物樣品TEM各實驗步驟要求,取材和預固定,透射電鏡動物普通組織,一般動物組織的取材,要點一是減少缺血缺氧時間,二是減少機械損傷,麻醉或斷頸處死均可,可根據(jù)實驗目的和條件選擇,具體如下:請盡快用戊二醛固定液預固定,如圖5所示,對圖片做選取傅里葉變換,選擇第二種校正方法,出現(xiàn)的變換結(jié)果中,選種對應的變換對稱點,點擊ok,出現(xiàn)的對話框中,填入對應晶面的1/d數(shù)值,并將單位改為1/nm,點擊ok即可。