如果灌注成功,小心轉(zhuǎn)移動(dòng)物尸體到潔凈托盤中,透射電鏡zui好用浸濕固定液的雙層紗布仔細(xì)覆蓋動(dòng)物,再覆蓋一層保鮮膜,室溫等待1h,(等待1h的目的是使組織充分定型、硬化,減少手術(shù)切割時(shí)產(chǎn)生的機(jī)械損傷,不確定是否灌注成功時(shí)可不等待立即取材,4植物組織,植物組織取材需注意時(shí)間因素,用包埋樹脂或其混合液逐漸取代組織內(nèi)的脫水劑,細(xì)胞內(nèi)外所有的空隙被滲透填充,使包埋劑逐步滲透到組織細(xì)胞內(nèi)部,以便與細(xì)胞外的包埋劑同時(shí)聚合。
小鼠建議液量30ml,大鼠至少100ml,貓約500ml,透射電鏡并以此估計(jì)其他小動(dòng)物用量,(8)固定液灌注過程中,觀察動(dòng)物肢體是否充分僵硬,黏膜、內(nèi)臟等是否充分褪去血色,如果灌注液用量過半仍沒有這些現(xiàn)象,立即終止灌注,行搶救性切割取材,(9)灌注完成后,撤去灌注器械,分辨率為該透射電鏡理論上能分辨zui小尺寸的能力極限,表示拍攝照片中單個(gè)像素點(diǎn)對應(yīng)實(shí)際尺寸的大小,與放大倍數(shù)聯(lián)合表示了電鏡照片中相關(guān)細(xì)微結(jié)構(gòu)的區(qū)分能力。
生物樣品TEM各實(shí)驗(yàn)步驟要求,取材和預(yù)固定,透射電鏡動(dòng)物普通組織,一般動(dòng)物組織的取材,要點(diǎn)一是減少缺血缺氧時(shí)間,二是減少機(jī)械損傷,麻醉或斷頸處死均可,可根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蜅l件選擇,具體如下:請盡快用戊二醛固定液預(yù)固定,如圖5所示,對圖片做選取傅里葉變換,選擇第二種校正方法,出現(xiàn)的變換結(jié)果中,選種對應(yīng)的變換對稱點(diǎn),點(diǎn)擊ok,出現(xiàn)的對話框中,填入對應(yīng)晶面的1/d數(shù)值,并將單位改為1/nm,點(diǎn)擊ok即可。