動物恰當麻醉,腹部朝上綁定在操作臺上,開腹,透射電鏡有利于觀察灌注效果,不必觀察時,或某些需要保持腹腔器官原位置的實驗,可直接開胸,從劍突下小心剪破膈,使肺回縮(避免剪到肺造成出血),透射電鏡隨后向兩側擴大破口,與腹壁切口靠近,剪斷兩側肋骨,繼續向頭端擴展切口,直到露出心房,用吸管小心棄上清,加入預熱到40℃的GT2專用溶液重懸細胞(輕輕搖勻或吹吸均可,不要有肉眼可見的大塊);立即以3000rpm離心10min。
小型實驗動物的腦深部組織、脊髓等不易快速取出固定的標本,或需要大范圍、多器官取材時,可采用經心臟灌注固定,透射電鏡固定液zui好采用2%多聚甲醛+2,5%戊二醛,需要保全心臟相關結構的實驗,或者要觀察肺組織充氣形態的實驗禁用經心臟灌注的方法,具體步驟如下:,這些數據的二次分析成為研究工作分析和論文撰寫的重要部分,尤其是高倍透射圖片,通過后處理可獲得很多充分的數據性結果,能夠為結構和機理等的深入分析提供有力證據。
生物樣品TEM各實驗步驟要求,取材和預固定,透射電鏡動物普通組織,一般動物組織的取材,要點一是減少缺血缺氧時間,二是減少機械損傷,麻醉或斷頸處死均可,可根據實驗目的和條件選擇,具體如下:請盡快用戊二醛固定液預固定,如圖5所示,對圖片做選取傅里葉變換,選擇第二種校正方法,出現的變換結果中,選種對應的變換對稱點,點擊ok,出現的對話框中,填入對應晶面的1/d數值,并將單位改為1/nm,點擊ok即可。