該過程控制在1min內(nèi)完成,(zui好有壓力控制裝置,如果沒有,zui好采用吊瓶,瓶的懸掛高度應(yīng)通過動(dòng)物血壓的厘米水柱數(shù)值估計(jì),小鼠、大鼠等一般掛在高于動(dòng)物身體1,5m處,停止鹽水灌注,通過三通管換用固定液繼續(xù)灌注(室溫),初始速度與鹽水一致;當(dāng)動(dòng)物開始強(qiáng)烈抽搐后,降低流速,透射電鏡從輸液器膠囊觀察窗看,維持每秒2滴,(10)常規(guī)手術(shù)取材、切割標(biāo)本,浸泡固定30min后轉(zhuǎn)入4℃冰箱過夜(此步驟同普通組織取材)。
每個(gè)容器含有N個(gè)組織時(shí):,透射電鏡容器體積要適當(dāng)增大;組織不要相互擠壓變形,2動(dòng)物鈣化硬組織,基本的取材和預(yù)固定要求與普通組織相同,預(yù)固定充分后(至少過夜),轉(zhuǎn)入EDTA脫鈣固定液脫鈣,脫鈣務(wù)必充分,確保切片操作無障礙,3須灌注固定的動(dòng)物組織,如圖7所示的石墨碳包覆納米鈷,通過DM軟件的偽色功能,右擊圖片,選擇ImageDisplay中的color,更改涂色模式和色階將圖片上偽色,可以充分提高圖片的顯示效果。
生物樣品TEM各實(shí)驗(yàn)步驟要求,取材和預(yù)固定,透射電鏡動(dòng)物普通組織,一般動(dòng)物組織的取材,要點(diǎn)一是減少缺血缺氧時(shí)間,二是減少機(jī)械損傷,麻醉或斷頸處死均可,可根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蜅l件選擇,具體如下:請(qǐng)盡快用戊二醛固定液預(yù)固定,如圖5所示,對(duì)圖片做選取傅里葉變換,選擇第二種校正方法,出現(xiàn)的變換結(jié)果中,選種對(duì)應(yīng)的變換對(duì)稱點(diǎn),點(diǎn)擊ok,出現(xiàn)的對(duì)話框中,填入對(duì)應(yīng)晶面的1/d數(shù)值,并將單位改為1/nm,點(diǎn)擊ok即可。