該過(guò)程控制在1min內(nèi)完成，（zui好有壓力控制裝置，如果沒(méi)有，zui好采用吊瓶，瓶的懸掛高度應(yīng)通過(guò)動(dòng)物血壓的厘米水柱數(shù)值估計(jì)，小鼠、大鼠等一般掛在高于動(dòng)物身體1，5m處，停止鹽水灌注，通過(guò)三通管換用固定液繼續(xù)灌注（室溫），初始速度與鹽水一致；當(dāng)動(dòng)物開(kāi)始強(qiáng)烈抽搐后，降低流速，透射電鏡從輸液器膠囊觀察窗看，維持每秒2滴，（10）常規(guī)手術(shù)取材、切割標(biāo)本，浸泡固定30min后轉(zhuǎn)入4℃冰箱過(guò)夜（此步驟同普通組織取材）。

夾持劍突，將胸廓整體向頭端外翻并固定，充分暴露心臟，（此步為灌注操作的關(guān)鍵，針尖務(wù)必留在左心室，如果發(fā)現(xiàn)穿破室間隔、房室隔或心壁，須繼續(xù)小心進(jìn)針，直到針頭進(jìn)入升主動(dòng)脈，然后仍?shī)A持心臟，），灌注預(yù)熱到體溫的生理鹽水，同時(shí)剪破右心耳放血，直到右心耳流出的液體基本不帶血色，zui好刮取細(xì)胞，收集在離心管中，1500rpm離心10min（該參數(shù)可按自己的經(jīng)驗(yàn)調(diào)整，目的是不損傷細(xì)胞結(jié)構(gòu)的情況下去掉培養(yǎng)液成分）。

生物樣品TEM各實(shí)驗(yàn)步驟要求，取材和預(yù)固定，透射電鏡動(dòng)物普通組織，一般動(dòng)物組織的取材，要點(diǎn)一是減少缺血缺氧時(shí)間，二是減少機(jī)械損傷，麻醉或斷頸處死均可，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蜅l件選擇，具體如下：請(qǐng)盡快用戊二醛固定液預(yù)固定，如圖5所示，對(duì)圖片做選取傅里葉變換，選擇第二種校正方法，出現(xiàn)的變換結(jié)果中，選種對(duì)應(yīng)的變換對(duì)稱點(diǎn)，點(diǎn)擊ok，出現(xiàn)的對(duì)話框中，填入對(duì)應(yīng)晶面的1/d數(shù)值，并將單位改為1/nm，點(diǎn)擊ok即可。