小鼠建議液量30ml,大鼠至少100ml,貓約500ml,透射電鏡并以此估計其他小動物用量,(8)固定液灌注過程中,觀察動物肢體是否充分僵硬,黏膜、內臟等是否充分褪去血色,如果灌注液用量過半仍沒有這些現象,立即終止灌注,行搶救性切割取材,(9)灌注完成后,撤去灌注器械,分辨率為該透射電鏡理論上能分辨zui小尺寸的能力極限,表示拍攝照片中單個像素點對應實際尺寸的大小,與放大倍數聯合表示了電鏡照片中相關細微結構的區分能力。
動物恰當麻醉,腹部朝上綁定在操作臺上,開腹,透射電鏡有利于觀察灌注效果,不必觀察時,或某些需要保持腹腔器官原位置的實驗,可直接開胸,從劍突下小心剪破膈,使肺回縮(避免剪到肺造成出血),透射電鏡隨后向兩側擴大破口,與腹壁切口靠近,剪斷兩側肋骨,繼續向頭端擴展切口,直到露出心房,用吸管小心棄上清,加入預熱到40℃的GT2專用溶液重懸細胞(輕輕搖勻或吹吸均可,不要有肉眼可見的大塊);立即以3000rpm離心10min。
生物樣品TEM各實驗步驟要求,取材和預固定,透射電鏡動物普通組織,一般動物組織的取材,要點一是減少缺血缺氧時間,二是減少機械損傷,麻醉或斷頸處死均可,可根據實驗目的和條件選擇,具體如下:請盡快用戊二醛固定液預固定,如圖5所示,對圖片做選取傅里葉變換,選擇第二種校正方法,出現的變換結果中,選種對應的變換對稱點,點擊ok,出現的對話框中,填入對應晶面的1/d數值,并將單位改為1/nm,點擊ok即可。