該過程控制在1min內完成,(zui好有壓力控制裝置,如果沒有,zui好采用吊瓶,瓶的懸掛高度應通過動物血壓的厘米水柱數值估計,小鼠、大鼠等一般掛在高于動物身體1,5m處,停止鹽水灌注,通過三通管換用固定液繼續灌注(室溫),初始速度與鹽水一致;當動物開始強烈抽搐后,降低流速,透射電鏡從輸液器膠囊觀察窗看,維持每秒2滴,(10)常規手術取材、切割標本,浸泡固定30min后轉入4℃冰箱過夜(此步驟同普通組織取材)。
動物恰當麻醉,腹部朝上綁定在操作臺上,開腹,透射電鏡有利于觀察灌注效果,不必觀察時,或某些需要保持腹腔器官原位置的實驗,可直接開胸,從劍突下小心剪破膈,使肺回縮(避免剪到肺造成出血),透射電鏡隨后向兩側擴大破口,與腹壁切口靠近,剪斷兩側肋骨,繼續向頭端擴展切口,直到露出心房,用吸管小心棄上清,加入預熱到40℃的GT2專用溶液重懸細胞(輕輕搖勻或吹吸均可,不要有肉眼可見的大塊);立即以3000rpm離心10min。
生物樣品TEM各實驗步驟要求,取材和預固定,透射電鏡動物普通組織,一般動物組織的取材,要點一是減少缺血缺氧時間,二是減少機械損傷,麻醉或斷頸處死均可,可根據實驗目的和條件選擇,具體如下:請盡快用戊二醛固定液預固定,如圖5所示,對圖片做選取傅里葉變換,選擇第二種校正方法,出現的變換結果中,選種對應的變換對稱點,點擊ok,出現的對話框中,填入對應晶面的1/d數值,并將單位改為1/nm,點擊ok即可。